http://hdl.handle.net/10174/249 2026-04-06T13:16:21Z http://hdl.handle.net/10174/5369 Title: Estudio de una NDP-X hidrolasa de Yersinia intermedia con actividad preferente sobre CDP-X: identificación probable como una 5’-nucleotidasa/ CDP-X hidrolasa Authors: Alves-Pereira, Isabel Abstract: RESUMEN Este trabajo de investigación forma parte de una línea más amplia dedicada a la identificación y caracterización de nucleósido-difosfato-X (NDP-X) hidrolasas de diversas fuentes biológicas, principalmente humanas y bacterianas. El objetivo concreto de este trabajo ha sido la caracterización de una enzima con actividad de CDP-X hidrolasa detectada en cultivos puros de Yersinia intermedia, preparados a partir de un aislado bacteriano obtenido de un extracto de pulmón de rata [Martín-Cordero, P. (2002) Tesis Doctoral, Universidad de Extremadura]. La actividad CDP-X hidrolasa (medida con CDP-etanolamina como sustrato) se purificó parcialmente a partir del medio extracelular de suspensiones de Y. intermedia, por cromatografía de filtración en gel y cromatografía de intercambio iónico. La enzima se caracterizó molecularmente en cuanto a su peso molecular (52000) y su punto isoeléctrico (6,5). Se estudió su especificidad de sustrato y de reacción, encontrándose que se trata de una NDP-X hidrolasa con preferencia por sustratos CDP-X, particularmente CDP-glicerol y CDP-etanolamina, y de forma menos marcada por derivados UDP-azúcar. Además de la actividad NDP-X hidrolasa, la preparación enzimática resultó ser muy activa también sobre los nucleótidos AMP y CMP y sus homólogos difosforilados (CDP, ADP) y trifosforilados (ATP). Se estudió la naturaleza de los productos de reacción con CDP-glicerol, CDP-etanolamina, CDP-colina, UDP-glucosa, CDP, CMP y AMP. Los resultados indicaron que en todos los casos resultan hidrolizadas las uniones 5´-fosfoéster, entre la base y el primer fosfato, y fosfoanhídrido, entre los dos fosfatos (salvo en el caso particular del CMP y AMP, que no puede sufrir esta última reacción). Se estudió la cinética de saturación, determinando valores de Km para varios sustratos, que ofrecieron resultados similares. Se estudió también el efecto de variaciones de pH y de cationes divalentes sobre la actividad enzimática. Los resultados del estudio realizado indican que la CDP-X hidrolasa de Y. intermedia puede ser una 5´-nucleotidasa / NDP-X hidrolasa similar a la conocida en Escherichia coli como 5´-nucleotidasa / UDP-azúcar hidrolasa (codificada por el gen ushA). Sin embargo, respecto a lo que se conoce sobre la enzima de E. coli, la enzima aquí estudiada presenta la novedad de su actividad sobre algunos derivados CDP-X, superior a la que presenta sobre derivados UDP-X. Actualmente este estudio se está continuando con la caracterización de la 5´-nucleotidasa / UDP-azúcar hidrolasa de E. coli, a partir de cultivos normales de esta bacteria y de cultivos que sobreexpresan la enzima a partir de un plásmido portador del gen ushA. 2004-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10174/1071 Title: Síntese, caracterização e previsão das propriedades ópticas não lineares de compostos organometálicos de ruténio(II) Authors: (Sem Autor Definido) Abstract: Estudos recentes em derivados de η5-monociclopentadienilo previram que sistemas aromáticos contendo anéis de tiofeno ligados ao centro metálico por uma função acetilénica deveriam originar melhores propriedades ópticas não lineares de segunda ordem pela maximização das respectivas hiperpolarizabilidades quadráticas a nível molecular. Tendo subjacente esta ideia, neste trabalho foram sintetizados e caracterizados derivados de η5-monociclopentadieniloruténio(II) de fórmula geral [η5-CpRu(PP)C≡C{SC4H2}nA] (PP=DPPE, 2PPh3; n=1,2; A=NO2, CHO) e previsto o seu comportamento quanto às propriedades ópticas não lineares pela análise dos respectivos dados espectroscópicos e electroquímicos. No Capítulo 1 é feita uma introdução ao fenómeno da óptica não linear, onde se mostram os principais efeitos e técnicas experimentais para a determinação das propriedades de NLO de segunda ordem, bem como os principais requisitos electrónicos e estruturais de uma molécula para que esta tenha essas propriedades. É apresentado ainda uma breve descrição e alguns exemplos de compostos organometálicos referidos na literatura para este fim. No Capítulo 2 descreve-se quer a síntese e caracterização dos ligandos utilizados neste trabalho, quer a síntese e caracterização dos compostos organometálicos dos quais se pretende prever as propriedadeas de NLO. Os ligandos e os compostos organometálicos foram caracterizados por métodos espectroscópicos (IV, UV-Vis, 1H-RMN, 13C-RMN e 31P-RMN) e por voltametria cíclica com o intuito de se avaliar o grau de interacção dos centros metálicos com o sistema electrónico  dos ligandos, procurando-se correlacionar os resultados obtidos de modo efectuar-se uma estimativa qualitativa da magnitude da hiperpolarizabilidade quadrática, β. A correlação efectuada mostrou que a família de compostos sintetizados deverá apresentar maiores valores de β que compostos análogos contendo derivados acetilénicos de benzeno e derivados de nitrilo contendo anéis de tiofeno referidos na literatura, em particular os compostos que apresentam DPPE como co-ligando, o grupo nitro como grupo aceitador e uma maior extensão do sistema aromático dos ligandos. No Capítulo 3 apresentam-se as conclusões gerais do trabalho desenvolvido enquanto que no Capitulo 5 são apresentados os detalhes experimentais de síntese e caracterização espectroscópica e por voltametria cíclica de todos os compostos sintetizados. 2007-09-02T23:00:00Z http://hdl.handle.net/10174/1067 Title: Cálculos de hiperpolarizabilidade em complexos organometálicos de ferro usando o método de DFT Authors: Conde, Luís M. S. Abstract: Estudos recentes em compostos organometálicos derivados de η5-monociclopentadienilo metálicos previram que sistemas aromáticos contendo anéis de tiofeno ligados ao centro metálico por uma função acetilénica deveriam originar melhores hiperpolarizabilidades quadráticas a nível molecular. Com esta ideia em mente, o principal objectivo deste trabalho foi utilizar cálculos de DFT e TD-DFT (DFT dependente do tempo) na determinação da hiperpolarizabilidade quadrática (β) de derivados de η5-monociclopentadieniloferro(II), de fórmula geral [η5-CpFe(PP)(C≡C{SC4H2}Y)] (PP= H2PCH2CH2PH2, Y= NMe2, NH2, OMe, H, Br, CHO, CN, NO2), no sentido de compreender os factores electrónicos responsáveis pelas suas propriedades ópticas não lineares de segunda ordem. Procurou-se estudar o papel do fragmento organometálico na hiperpolarizabilidade quadrática dos derivados acetilénicos de tiofeno e analisar a influência dos seus grupos substituintes no valor daquela propriedade, relacionando-a com as características da estrutura electrónica molecular. Para isso, realizaram-se também cálculos de DFT nos respectivos tiofenos não coordenados (HC≡C{SC4H2}Y) e correlacionaram-se os dados obtidos com os dos correspondentes compostos organometálicos. Nos cálculos de DFT foram utilizados o funcional híbrido B3LYP e a base de funções 6-31+G** para o tratamento dos electrões dos átomos C, N, O e H e a base de funções LANL2DZ com ECPs para o tratamento dos electrões de valência dos átomos de S, P e Fe. Foi utilizado o pacote de software GAUSSIAN 03W para todas as optimizações da geometria molecular e cálculos energéticos efectuados. 2007-09-30T23:00:00Z