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Seroepidemiology of Rickettsia conorii in dogs in Portugal: a comprehensive 12-year retrospective study (2013–2024)

2026-04-09T15:15:13Z

Title: Seroepidemiology of Rickettsia conorii in dogs in Portugal: a comprehensive 12-year retrospective study (2013–2024) Authors: Lopes, Ricardo; Carvalho, Hugo L; Garces, Andreia; Fernandes, Cátia; Lopes; Martins, A; Duarte, Elsa Leclerc; Cardoso, Luis Lucas; Coelho, AC Abstract: Background Mediterranean spotted fever (MSF), caused by Rickettsia conorii, is a zoonotic tick-borne disease of important public health concern, particularly in the Mediterranean Basin. Dogs serve as key sentinels for MSF due to their exposure to vector ticks and close contact with humans. To date, no comprehensive study in Portugal has investigated epidemiological risk factors in dogs infected with or exposed to R. conorii. Methods Seropositivity to R. conorii was determined using an immunofluorescence antibody test (IFAT), with titres categorised as negative, low positive, moderate positive and high positive. Statistical analyses included the chisquared test and univariable logistic regression to assess associations between seropositivity and geographical region, season, month, size, breed, sex and age. Results This study analysed 2457 canine samples submitted from 228 veterinary medical centres across mainland Portugal and insular autonomous regions between 2013 and 2024. The overall seroprevalence of R. conorii was 27.0% (95% confidence interval [CI] 25.3–28.8). Significant differences in seroprevalence were observed amongst regions, with the highest values in the Algarve (48.0%; odds ratio [OR] 3.1, 95% CI 2.2–4.4, P<0.001), Alentejo (35.0%; OR1.8, 95% CI 0.7−4.6, P=0.210) and Centre (33.8%; OR 1.7, 95% CI 1.4–2.1, P<0.001) regions. Giant breeds had the highest seroprevalence (33.0%; OR3.0, 95% CI 1.3–6.6, P=0.008), with Irish Setter and Miniature Schnauzer identified as highrisk breeds (75.0%; OR27.0, 95% CI 1.3–578.4, P=0.035). Male dogs had higher seroprevalence (28.9%; OR1.2, 95% CI 1.0–1.5, P=0.023), whilst geriatric dogs showed the highest risk of exposure to or infection with R. conorii (34.6%; OR5.2, 95% CI 2.8–9.8, P<0.001). Conclusions This study represents the most extensive epidemiological analysis of canine MSF in Portugal. The findings highlight associations between R. conorii seropositivity and geographical region, size, breed, sex and age of dogs, advancing the limited knowledge on the epidemiology of R. conorii in Portugal and underscoring the need for regional surveillance and targeted prevention to reduce infection risks in both canine populations and public health contexts.

PHOTODYNAMIC THERAPY INDUCED OXIDATIVE STRESS IN OCULAR MELANOMA CELLS

2026-02-27T17:45:08Z

Title: PHOTODYNAMIC THERAPY INDUCED OXIDATIVE STRESS IN OCULAR MELANOMA CELLS Authors: Guerra Guimarães, Tarcísio; Mamede, Fabrício; Cardoso, Karla; Pereira, Nelson; Pineiro, Marta; Pinho e Melo, Teresa; Alexandre, Nuno; Botelho, Maria Filomena; Laranjo, Mafalda Abstract: Purpose: To assess the oxidative stress induced by photodynamic therapy (PDT) using new photosensitizers the dihydroxymethyl ring-fused chlorin (PS1) and dihydroxymethyl-Pt(II) ring-fused chlorin (PS2), in ocular melanoma cells. Methods: Ocular melanoma cell line MP-41 was cultured and incubated with 100 and 500 nM concentrations of the photosensitizers for 24 hours. After renewing the culture medium, the cells were irradiated with visible light (λ>570nm, 10J). To study the role of singlet oxygen and hydroxyl radicals, the cells were treated with PDT in the presence of sodium azide (5mM) and D-mannitol (40mM). Intracellular superoxide and peroxide levels were measured using DHE (5μM) and DCF-HA (5μM), respectively, followed by spectrophotometric and fluorimetric analyses. Results: Inhibition of singlet oxygen increased metabolic activity in cells treated with 100 nM PS1 and PS2 from 48.4±13.6 to 118.8±4.7 and from 56.4±16.8 to 102.0±3.6, respectively. With 500 nM PS1 and PS2 from 0,77±0,2 to 8,3±3,29 and from 2,3±1,7 to 12,2±1,6, respectively. The presence of a superoxide radical scavenger led to metabolic activities with 100 nM PS1 and PS2 from 48,4±13,6 to 67,3±19,5 and from 56,4±15,6 to 75,5±13,2, respectively. With 500 nM PS1 and PS2 from 0,77±0,2 to 6,3±4,5 and from 2,3±1,7 to 17,4±8,3, respectively. Conclusions: Reactive Oxygen Species (ROS) generation is key in PDT-induced cell death, with singlet oxygen playing a predominant role in the type II photodynamic process, as demonstrated by the chlorins' efficacy in ocular melanoma cells. The reduced peroxide and superoxide levels suggest singlet oxygen's significant generation, though type I reactions may also be involved. Key-words: ocular melanoma, PDT, photosensitizers, ROS.

NUEVAS CLORINAS COMO AGENTES FOTODINÁMICOS PROMETEDORES EN CÉLULAS DE MELANOMA OCULAR HUMANO, CANINO Y FELINO

2026-02-27T10:37:54Z

Title: NUEVAS CLORINAS COMO AGENTES FOTODINÁMICOS PROMETEDORES EN CÉLULAS DE MELANOMA OCULAR HUMANO, CANINO Y FELINO Authors: Guerra Guimarães, Tarcísio; Tralhão, Pedro; Menezes Cardoso, Karla; Marto, Miguel; Teixo, Ricardo; Serambeque, Beatriz; Pereira, Nelson; Pineiro, Marta; Pinho e Melo, Teresa; Alexandre, Nuno; Filomena Botelho, Maria; Laranjo, Mafalda Abstract: Introducción Los melanomas oculares son neoplasias malignas de origen melanocítico que afectan con frecuencia a humanos, perros y gatos1. Hay varias opciones de tratamiento disponibles, sin embargo, el desarrollo de nuevas terapias conservadoras es de suma importancia, ya que la enucleación es un procedimiento muy agresivo2. La terapia fotodinámica (PDT) es un tratamiento conservador que genera especies reactivas de oxígeno (ROS), provocando una toxicidad selectiva irreversible y como resultado, la muerte de las células neoplásicas por apoptosis, necrosis y autofagia3,4. El fotosensibilizador, la luz visible y el oxígeno son los tres componentes vitales no tóxicos de la reacción fotodinámica3,4. De hecho, el fotosensibilizante se considera el factor más importante. Así, varios centros de investigación tienen como objetivo estudiar y desarrollar nuevos fotosensibilizadores con las características idóneas para el tratamiento del cáncer4. Objetivos Evaluar la citotoxicidad inducida por la PDT basada en fotosensibilizadores (clorinas fusionadas en anillo) desarrollado recientemente, en células de melanoma ocular humano, canino y felino. Material y métodos La línea celular de melanoma ocular humana MP-41, un cultivo de células primarias de melanoma ocular canino y un cultivo de células primarias de melanoma ocular felino, se sometieron a fotosensibilizadores (PS1-derivado dihidroximetílico de 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina fusionado con tetrafenilcloro, PS2-derivado de ácido dicarboxílico de 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina fusionado con tetrafenilclorina, PS3-complejo de platino (II) de derivado de 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina dihidroximetilo fusionado con tetrafenilcloro, PS4-derivado diácido carboxílico de colina de Pt (II) fusionado con anillo de 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina) a concentraciones entre 0.5-1000 nM durante 24 horas. Las células se irradiaron con luz visible (ƛ>570 nm) con un total de 10 J de energía. Los grupos control incluyeron: células no tratadas y células sometidas únicamente al vehículo de administración (DMSO). La evaluación de citotoxicidad (MTT) se realizó 24 horas después de la PDT y permitió el análisis del valor de la mitad de la concentración inhibitoria máxima (IC50). Resultados El compuesto más activo fue clorina PS1, con un valor IC50 de 95.1 nM. PS3 también mostró una actividad fotodinámica prometedora con un valor IC50 de 114.8 nM en células de melanoma ocular humano. Estas clorinas también mostraron resultados muy satisfactorios en células caninas, con una IC50 de 0.6 nM para PS1 y 2.2 nM para PS3.También se obtuvo alta actividad a bajas concentraciones con los fotosensibilizadores PS1 y PS3 en células de melanoma ocular felino, con IC50 de 10.8 nM y 41.2 nM, respectivamente. Los fotosensibilizadores PS2 y PS4 fueron menos eficaces en todas las células de melanoma ocular.Discusión y conclusiones Los melanomas oculares tienen tasas de respuesta variables a los tratamientos conservadores1,3. La terapia fotodinámica es una modalidad en evolución para el tratamiento de diversas enfermedades, incluidas las neoplasias oculares2,4. El desarrollo de nuevos compuestos es fundamental para la optimización de los tratamientos fotodinámicos3,5. Los nuevos fotosensibilizadores mostraron buenas propiedades fotodinámicas en células de melanoma ocular en las especies estudiadas. El tratamiento con PDT indujo citotoxicidad 24 horas después del tratamiento. Los valores de IC50 obtenidos con PDT indicaron una alta actividad en muy bajas concentraciones de los nuevos fotosensibilizadores en el rango nanomolar, en células de melanoma ocular humano, canino y felino. Futuros estudios deberían realizarse para valorar el posible uso clínico de estas moléculas y sus posibles secuelas oculares en pacientes. Referencias 1. Guimarães TG, Marto CM, Cardoso KM, Alexandre N, Botelho MF, Laranjo M. Evaluation of eye melanoma treatments in rabbits: A systematic review. Lab Anim. Published online September 9, 2021:002367722110393. 2. Guimarães TG, Cardoso KM, Tralhão P, et al. Current Therapeutics and Future Perspectives to Ocular Melanocytic Neoplasms in Dogs and Cats. Bioengineering. 2021;8(12):225. 3. Laranjo M, Aguiar MC, Pereira NAM, et al. Platinum(II) ring-fused chlorins as efficient theranostic agents: Dyes for tumor-imaging and photodynamic therapy of cancer. Eur J Med Chem. 2020;200:112468. 4. Guimarães TG, Cardoso KM, Marto CM, et al. Oncological Applications of Photodynamic Therapy in Dogs and Cats. Appl Sci 2022, Vol 12. 2022;12(23):12276. 5. Pereira NAMM, Laranjo M, Pina J, et al. Advances on photodynamic therapy of melanoma through novel ring-fused 5,15-diphenylchlorins. Eur J Med Chem. 2018;146:395-408.

EFEITO ANTIMICROBIANO DA TERAPIA FOTODINÂMICA EM LESÃO CUTÂNEA NUM CÃO: RELATO DE CASO

2026-02-27T10:36:47Z

Title: EFEITO ANTIMICROBIANO DA TERAPIA FOTODINÂMICA EM LESÃO CUTÂNEA NUM CÃO: RELATO DE CASO Authors: Menezes Cardoso, Karla; Guerra Guimarães, Tarcísio; Alexandre, Nuno Abstract: Introdução: A terapia fotodinâmica (PDT) é uma abordagem terapêutica que envolve a interação de três componentes atóxicos isoladamente: fotossensibilizador, luz e oxigênio molecular1. Este processo consiste na administração de um fotossensibilizador, seguido pela irradiação com luz de comprimento de onda específico, resultando na geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) capazes de induzir efeitos citotóxicos e antimicrobianos1,2. A PDT na oncologia é utilizada para o tratamento de diferentes neoplasias, demonstrando alta seletividade para células malignas1. Além disso, em contextos antimicrobianos, a PDT tem se destacado como uma alternativa promissora no tratamento de infecções, em diferentes condições clínicas. Este trabalho descreve um caso clínico de um cão com lesão cutânea infectada, no qual a PDT foi aplicada, destacando não apenas seus efeitos antimicrobianos, mas também o potencial terapêutico da técnica como uma alternativa no tratamento de lesões cutâneas infectadas na prática veterinária. Descrição do caso clínico: Um cão macho, de 11 anos e sem raça definida, foi referenciado para tratamento com PDT devido a uma lesão cutânea inflamatória, exsudativa, fétida em membro posterior e que não respondeu a diversos tratamentos antimicrobianos. Em seu histórico pregresso, consta a realização de amputação de um dígito devido a trauma, com a análise histológica revelando lesão pioranulomatosa. A cultura cutânea e o antibiograma revelaram uma infecção mista por Pseudomonas spp. e Candida albicans, sem sensibilidade a qualquer antimicrobiano testado. Embora foi identificada um antimicrobiano como único fármaco com ação (Sensível aumentando exposição), tendo o mesmo sido previamente utilizada no tratamento, embora sem sucesso suficiente. Diante do quadro de resistência terapêutica antimicrobiana, a PDT foi indicada. Inicialmente, a lesão foi limpa com solução salina estéril e em seguida, aplicou-se creme de 5-ALA (20%), cobrindo toda a extensão da ferida, 4 horas antes da irradiação. A lesão foi irradiada com LED vermelho (635 nm), com total de energia de 100 J. Após a sessão da PDT, foi recomendado o uso do colar protetor e a manutenção do animal em um ambiente domiciliar limpo, restrito e controlado. Resultados: O acompanhamento clínico pós-PDT foi realizada 7 dias após a sessão terapêutica. Observou redução significativa do exsudato purulento, do odor e melhora dos sinais de inflamação. Foi sugerida a continuidade do tratamento com sessões adicionais de PDT, mas, devido à recuperação clínica do animal, os tutores optaram por não prosseguir com outras sessões, sendo recomendado ainda o seguimento periódico na clínica de referência. Conclusão: Este caso demonstra que a PDT representa uma alternativa eficaz e segura no tratamento de lesões cutâneas infectadas em cães, especialmente em casos refratários a antibioticoterapia. O efeito antimicrobiano observado reforça o potencial da PDT como adjuvante no manejo de infecções resistentes, além de contribuir para o processo de cicatrização. Embora sejam necessárias padronização dos protocolos e avaliar os diferentes tipos de lesões e agentes infecciosos, os resultados apresentados indicam que a PDT pode desempenhar um papel promissor na terapia antimicrobiana na medicina veterinária. Bibliografia 1Guimarães, T.G., Cardoso, K.M., Tralhão, P., Marto, C. M., Alexandre, N., Botelho, M. F., & Laranjo, M. (2021). Current Therapeutics and Future Perspectives to Ocular Melanocytic Neoplasms in Dogs and Cats. Bioengineering, 8(12), 225. 2Maliszewska, I., & Zdubek, A. (2025). Assessing 5-Aminolevulinic Acid as a Natural Biocide Precursor for Light-Activated Eradication of Pseudomonas spp. International Journal of Molecular Sciences, 26(15), 7153. 3Wardlaw, J. L., Sullivan, T. J., Lux, C. N., & Austin, F. W. (2012). Photodynamic therapy against common bacteria causing wound and skin infections. The Veterinary Journal, 192(3), 374-377.